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上海酶科生物科技有限公司

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二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶(Rubisco)测试盒 货到付款
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产品: 浏览次数:98二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶(Rubisco)测试盒 货到付款 
品牌: 上海酶科
产品货号: YX-W-C703
产品规格: 25管/24样;50管/48样;100管/96样
最小起订量: 1 盒
供货总量: 10000 盒
发货期限: 自买家付款之日起 3 天内发货
有效期至: 长期有效
最后更新: 2020-03-09 13:15
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详细信息
 二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶(Rubisco)试剂盒说明书

紫外分光光度法

正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定

测定意义:

核酮糖-1,5-二磷酸核酮糖羧化/加氧酶(EC 4.1.1.39)是植物光合作用中的一个关键酶,既控制着CO2的固定,同时又制约着碳素向Calvin循环和光呼吸循环分流,其活性的大小直接影响着光合速率。

测定原理:

在 Rubisco 的催化下,1分子的核酮糖-1,5-二磷酸(RuBP)与1分子的 CO2结合,产生 2分子的3-磷酸(PGA),PGA 可通过外加的 3-磷酸激酶和甘油醛-3-磷酸脱氢酶的作用,产生甘油醛-3-磷酸,并使还原型辅酶 I(NADH)氧化。因此,340nm吸光度的变化可计算还原型辅酶 I 氧化速率,还原型辅酶 I 氧化速率可反应 Rubisco 的活性。

需自备的仪器和用品:

可见-紫外分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL 石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。

试剂的组成和配制:

提取液:25mL×1 瓶,4℃保存;

试剂一:25mL×1 瓶,4℃保存;

试剂二:粉剂×1 瓶,-20℃保存;

试剂三:粉剂×1 瓶,-20℃保存;临用前加入 875uL 蒸馏水充分溶解待用;用不完的试剂 4℃保存一周;

试剂四:粉剂×1 瓶,-20℃保存;临用前加入 875uL 蒸馏水充分溶解待用;用不完的试剂 4℃保存一周;

粗酶液制备 :

按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL提取液),进行冰浴匀浆。10000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。

测定步骤:

1、分光光度计预热 30min 以上,调节波长至 340nm,蒸馏水调零。

2、工作液的配制:临用前在试剂二中加入 22.5mL 试剂一,充分混匀,在 25℃孵育 5min;

现配现用;

3、测定:在 1mL 石英比色皿中依次加入 30uL 样本、35uL 试剂三、35uL 试剂四和 900uL

工作液,混匀;记录340nm处20 s时吸光值A1和2 min 20 s时的吸光值A2,计算ΔA=A1-A2。

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